免疫沉淀

基本实验流程
1
收集细胞,加入细胞中,从IP的裂解缓冲液的适当的量(包括蛋白酶抑制剂),它们被切断冰或4℃下进行30分钟,然后在12,000 g下离心30分钟,然后取上清液。
2
在西方采取少量裂解液。
通过转移分析,相应的抗体和10?蛋白酶??在A / G珠50μl的1微克的添加到用于裂解物的剩余部分细胞裂解物,并在温和搅拌4℃温育过夜..
3
免疫沉淀后,通过离心分离5分钟,以3,000下于4℃下,离心分离,并在管的底部蛋白A / G珠。小心吸出上清液,蛋白质
用1ml裂解缓冲液洗涤A / G珠子3至4次。最后,加入15μl2×SDS上样缓冲液并煮沸10分钟。
SDS-PAGE,Western印迹或质谱。
免疫共沉淀服务(CO-IP)
基本步骤
准备IP缓冲区,IP缓冲区(包括PMSF)
4
转染或治疗后36小时,将细胞用冷PBS洗涤,收获细胞。
排水后,可将其冷冻至-80℃。

在冰上移动20分钟,间歇混合并倒置。
6
添加IP缓冲液(含有PMSF)并在冰上超声处理。
7
离心收集上清液,以50μl作为输入。
8
用1ml冷IP缓冲液洗涤Flag M2珠子。
9
在6孔板中每个珠子/孔10μl。
洗涤珠子后,重悬于等体积的IP缓冲液中。
10年
加入4°C珠子并在半夜翻身。
11
将上清液以5000rpm丢弃1分钟。
12年
洗净珠子,弃去上清液,加入2×SDS上样缓冲液。
在4℃下切除5分钟,在100℃下切除5分钟。
13年
去除液体,WB。

来源:365足球外围投注//所属分类:365bet平台规则/更新时间:2019-05-03
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